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耐药细胞株的准备工作有哪些
点击次数:72 发布时间:2019-09-09
   耐药细胞株通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株(Cell Strain),也就是说,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群.细胞均经过支原体检测,通过培养法及Hochster染色法进行支原体检测。
  耐药细胞株准备工作:
  准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。
  耐药细胞株培养:
  将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养,则直接将组织块接入培养器皿底部,几个小时后组织块可贴牢在底部,再加入培养基。如系细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,按要求以一定的量(以每毫升细胞数表示)接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。
  耐药细胞株保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、 -80℃ 冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
  耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身生物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp(或P-170)糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受。
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